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Estudo e desenvolvimento de vacinas; Vacinas gênicas ou vacinas de DNA; Esquemas da estratégia de produção de uma vacina de DNA; Vacinas de microorganismos vivos recombinantes; Esquema de eventos de recombinação homóloga simples e dupla que ocorre após a introdução de plasmídeos suicidas no genoma de patógenos, para o desenvolvimento de vacinas de microorganismos vivos recombinantes

Biotecnologia aplicada às vacinas de DNA

A vacinação visa sensibilizar o organismo contra patógenos que poderão causar alguma infecção futura. Com o avanço da biotecnologia, foi proposta a interação entre vacinas e DNA com o objetivo de gerar uma sensibilização mais segura e correta, porém, as vacinas de DNA mostraram-se pouco eficazes. Na tentativa de melhorar a sua atuação, alguns métodos biotecnológicos são sugeridos como o uso de adjuvantes e aprimoramento dos métodos de entrega do material genético. O Trabalho objetiva explicar alguns desses métodos, mostrando a sua eficácia junto às vacinas de DNA na indução da resposta imune essencial para a prevenção contra agentes externos ao organismo

Avaliação do sistema de entrega e estabilidade de uma vacina de DNA contendo o gene ssiv DE Brucella abortus, encapsulada em nanopartículas de quitosana.

Brucelose bovina é uma zoonose infecciosa de evolução crônica, provocada por bactérias do gênero Brucella. Vacinação é uma das medidas mais efetivas para reduzir a prevalência desta doença e, devido a algumas desvantagens das vacinas atualmente utilizadas, novas formulações, como as vacinas de DNA, estão em testes. Nanopartículas são potenciais carreadores de vacinas de DNA e, entre os polímeros de origem natural, a quitosana tem se mostrado apropriada por ser biodegradável, biocompatível e não tóxico. O complexo vacina de DNA e nanopartículas de quitosana poderá prevenir a degradação da vacina por nucleases e otimizar a entrega de genes no interior das células de mamíferos, melhorando assim a resposta imune efetiva

Análise da imunogenicidade de uma proteína recombiante em camundongos BALB/c visando o desenvolvimento de vacina contra tristeza parasitária bovina.

Linfadenite caseosa é uma doença infectocontagiosa, causada pela bactéria Gram-positiva Corynebacterium pseudotuberculosis, que acomete principalmente ovinos e caprinos. Há necessidade do desenvolvimento de novas vacinas mais eficientes contra C. pseudotuberculosis, entre estas, as vacinas de DNA e de proteínas recombinantes. Isto tem sido favorecido pelos estudos sobre o genoma desta bactéria e seus determinantes moleculares. Devido à magnitude da resposta imune das vacinas de DNA ser relativamente fraca, nanopartículas preparadas por biomateriais têm sido utilizadas com o intuito de aumentar a resposta imune induzidas por estas vacinas. O gene psec foi identificado por imunovarredura de expressão gênica de C. pseudotuberculosis, e codifica uma proteína de membrana, que está envolvida na fisiologia da bactéria e invasão de células hospedeiras

Avaliação da imunogenicidade e proteção de vacinas recombinantes contra Corynebacterium pseudotuberculosis em camundongos.

Linfadenite caseosa é uma doença infectocontagiosa, causada pela bactéria Gram-positiva Corynebacterium pseudotuberculosis, que acomete principalmente ovinos e caprinos. Há necessidade do desenvolvimento de novas vacinas mais eficientes contra C. pseudotuberculosis, entre estas, as vacinas de DNA e de proteínas recombinantes. Isto tem sido favorecido pelos estudos sobre o genoma desta bactéria e seus determinantes moleculares. Devido à magnitude da resposta imune das vacinas de DNA ser relativamente fraca, nanopartículas preparadas por biomateriais têm sido utilizadas com o intuito de aumentar a resposta imune induzidas por estas vacinas. O gene psec foi identificado por imunovarredura de expressão gênica de C. pseudotuberculosis, e codifica uma proteína de membrana, que está envolvida na fisiologia da bactéria e invasão de células hospedeiras

On the safety and effectiveness of COVID-19 vaccines, certainties and uncertainties

Introduction: The COVID-19 vaccines in use (inactivaded virus, encapsulated m-RNA, non-replicating adenovirus-vectored DNA) were clinically tested in randomized placebocontrolled phase-3 studies. Objective: To address certainties and uncertainties about safety and effectiveness of COVID-19 vaccines that were approved for use in various countries. Method: The evidence provided by clinical studies on the efficacy and safety of COVID-19 vaccines was critically appraised. Results: COVID-19 vaccines proved to be efficacious and safe in clinical trials. Adverse events were mostly those of minor severity commonly noted with other vaccines such as injection site pain, mild flu-like symptoms, headache and asthenia. Although being very rare, anaphylaxis-like reactions were noted with mRNA vaccines. Uncertainties regarding vaccine effectiveness refer mainly to the (long-term) duration of immunity provided by vaccination, the degree of protection conferred to elderly people, and how effective vaccines are against emerging SARS-CoV-2 variants. There are few uncertainties about vaccine safety including the absence of clinical trial data in pregnant women (and the impact on the unborn child), children and adolescents. Conclusions:  Notwithstanding the knowledge gaps about effectiveness and safety of COVID-19 vaccines (to be further addressed by observational studies), there is overwhelming evidence that public health benefits of vaccination by far outweigh any foreseeable risk.TÍTULO PT: Sobre a segurança e efetividade das vacinas para COVID-19, certezas e incertezas Introdução: As vacinas contra COVID-19 (vírus inativado, m-RNA encapsulado, vetor adenovírus não replicante) foram testadas em ensaios clínicos randomizados (fase-3) controlados com placebo. Objetivo: Abordar as certezas e incertezas sobre segurança e efetividade das vacinas para COVID-19 já aprovadas para uso em vários países. Método: A evidência clínica de eficácia e segurança das vacinas contra COVID-19 foram examinadas criticamente. Resultados: As vacinas (COVID-19) mostraram ser eficazes e seguras nos ensaios clínicos. Os eventos adversos foram predominantemente os de menor  gravidade comumente observados com outras vacinas, tais como dor no  local da injeção, sintomas gripais leves, cefaleia e fraqueza. Embora sejam raras, reações do tipo anafilático foramregistradas com vacinas mRNA. As incertezas sobre efetividade referem-se à duração da imunidade conferida pela vacina, o grau de proteção de idosos, e a efetividade das vacinas contra as novas variantes do SARS-CoV-2. As incertezas sobre segurança são poucas e incluem a ausência de estudos clínicos em grávidas (e sobre o bebê no útero), em crianças e adolescentes. Conclusões: Não obstante as poucas lacunas acerca da efetividade e segurança das vacinas contra COVID-19 (a serem abordadas por estudos observacionais), os previsíveis benefícios da vacinação para a saúde pública excedem de longe quaisquer riscos antecipáveis

Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológica

Tese de mestrado em Biologia (Biologia Molecular e Genética), apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2008Actualmente, a utilização de DNA plasmídico (pDNA) como vector em Terapia génica, e em particular nas vacinas de DNA tem vindo a generalizar-se. Estas moléculas podem existir em diferentes conformações com diversos graus de superenrolamento. Várias evidências apontam para uma relação entre este superenrolamento e o sucesso das vacinas de DNA. O objectivo principal deste trabalho foi estudar o efeito do grau de superenrolamento na estabilidade estrutural e função biológica de plasmídeos destinados a terapia génica. Utilizaram-se seis plasmídeos todos derivados do vector comercial pVAX1/LacZ, três dos quais (pVAX1/GFP-BGH, pVAX1/GFP-SV40, pVAX1/GFP-Synt) contêm o gene que codifica a proteína repórter GFP (Green Fluorescent Protein) e os outros três (pVAX1/LacZ-BGH, pVAX1/LacZ-SV40, pVAX1/LacZ-Synt), o gene que codifica a proteína repórter ß-galactosidase. Dentro de cada grupo de três plasmídeos, as diferenças situam-se a nível das sequências de poliadenilação. A utilização de técnicas baseadas na electroforese em géis de agarose das séries completas de topoisómeros, permitiram a determinação do grau de superenrolamento dos plasmídeos utilizados como modelos de estudo. A análise estrutural dos mesmos, por electroforese bidimensional e espectroscopia de dicroísmo circular, não detectou qualquer transição estrutural ou conformação alterada. Estudou-se também a influência do superenrolamento na resistência dos plasmídeos à acção da nuclease S1 e verificou-se que os plasmídeos mais superenrolados são menos resistentes. Por fim, investigou-se o efeito do grau de superenrolamento na função biológica dos vectores plasmídicos e verificou-se que a isoforma superenrolada apresenta sempre percentagens de transfecção superiores à correspondente forma relaxada.The past decade has seen the use of plasmid DNA as a vector for gene therapy, in particular DNA Vaccines, broaden up. These therapeutic molecules may exist in several different conformations, and also in different degrees of supercoiling. Evidences show that there is a relation between the supercoiling and the vaccine's success. The scope of this research was to study the effect of different degrees of supercoiling in the structural stability and biological function of plasmid DNA, to be used in gene therapy. In order to do so, six model plasmids derived from the commercial pVax1/LacZ were used. Three of these plasmids (pVAX1/GFP-BGH, pVAX1/GFP-SV40, pVAX1/GFP-Synt) contained the reporter gene GFP (Green Fluorescent Protein) whereas, the other three (pVAX1/LacZ-BGH, pVAX1/LacZ-SV40, pVAX1/LacZ-Synt), contained the reporter gene ß-galactosidase. Within each group of the referred plasmids the differences lie specifically in the polyadenilation sequences. The use of tecniques based in agarose electrophoresis gels of all the series of topoisomers allowed to determine the degree of supercoiling of each of the plasmids used as a study model. Further structure analysis of the model plasmids by bidimensional electrophoresis and by circular dichroism has not detected any structural transition nor conformation change. The influence of supercoiling in the resistance to nucleases action was also studied, proving that the most supercoiled plasmids are more prone to the action of the S1 nuclease. Finally, the effect of the degree of supercoiling in the biological function of the DNA vaccines was also studied. The latter showed that the supercoiled isoforms of the model plasmids always presented higher transfection percentages than their corresponding relaxed isoform

Vacinas e plantas, relação em larga escala

As vacinas atualmente são consideradas imprescindíveis para o início do desenvolvimento do ser humano, sendo responsáveis pela proteção contra várias doenças infeciosas. Surgiram no século XIX com a produção da vacina contra a varíola. Vírus como a raiva, poliomielite, influenza e hepatite B foram combatidos com o desenvolvimento de vacinas ao longo dos séculos e, até aos dias de hoje ainda estão em comercialização. Este tipo de preparações é eficaz, conferindo proteção em alguns casos para toda a vida, ou por um determinado período de tempo. Fatores económicos e falhas no sistema de produção de proteínas terapêuticas levaram a investigar outros tipos de biofábricas. Os organismos fotossintéticos são os que apresentam mais vantagens, são económicos, crescem facilmente e permitem um melhor controlo de contaminações. As plantas podem expressar os antigénios ou anticorpos por dois sistemas o estável e o transitório, sendo o último o mais utilizado na produção de vacinas. O conceito de Plant Molecular Pharming é a mais recente tecnologia, existindo fábricas especializadas em produzir produtos terapêuticos baseados em plantas. A vacina contra o vírus Influenza e contra o Ébola são dois exemplos que estão bem encaminhados para atingir o sucesso.Vaccines are currently considered essential for the beginning of human development, being responsible for the protection against various infectious diseases. They emerged in the nineteen century with the production of the vaccine against smallpox. Viruses such as rabie, polio, influenza and hepatitis B have been combated with the development of vaccines over the centuries and to the present day are still in commercialization. This type of preparations is effective, conferring protection in some cases for life, or for a certain period of time. Economic factors and failure in therapeutic proteins production systems have led to investigate other types of biofactories. The photosynthetic organisms are those which have further advantages, are economical, grow easily and allow better control of contamination. The plants can express the antigens or antibodies of two systems satble and transient, but the most used in production of vaccine is the transient system. The concept of Plant Molecular Pharming is the new technology, existing factories specialized in producing therapeutic products based on plants. The vaccines against the influenza virus and Ebola are two examples that are on track to achieve success

Vacina para doença de chagas: possibilidade ou mito?

Trabalho de Conclusão de Curso - Universidade Federal de Santa Catarina. Curso de Medicina. Departamento de Clínica Médica